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腸集聚性大腸桿菌(EAEC)熒光PCR檢測(cè)試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：腸集聚性大腸桿菌(EAEC)核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒(PCR 熒光探針法)
Name ：Enteroconcentric Escherichia coli (EAEC) nucleic acid amplification detection kit (PCR fluorescence probe method)
【包裝規(guī)格】48T/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測(cè)水樣糞便等樣本中的腸集聚性大腸桿菌，用于腸集聚性大腸桿菌感染的輔助診斷，其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用 TaqMan 探針法實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，設(shè)計(jì)一對(duì)腸集聚性大腸桿菌特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR 技術(shù)對(duì)腸集聚性大腸桿菌的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)， 用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
| 1011-48中華鱉虹彩病毒（STIV）核酸檢測(cè)試劑盒 (熒光-PCR法) |
| 0811-48魚類神經(jīng)壞死病毒（VNN）核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
| 0911-48羅湖病毒（TiLV）核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
| 0221-48河弧菌(VF)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
| 0421-48出血性大腸桿菌O157:H7(EHEC O157)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
| 0721-48沙門氏菌SPP-sdfi核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
| 0821-48沙門氏菌SPP-spy核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；
5. 結(jié)果分析判定
【注意事項(xiàng)】
| 1211-48兔出血癥病毒2型(RHDV-2)核酸檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR法） |
| 1411-48塞尼卡谷病毒（SVV）核酸檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR法） |
| 1611-48小反芻獸疫病毒野毒株(PPRV-W)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
| 1711-48牛副流感病毒3型（BPIV-3）核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
| 1811-48牛呼腸孤病毒（BRV）核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
| 1911-48牛呼吸道合胞體病毒（BRSV）核酸檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法) |
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。
5.2 結(jié)果判斷
陽性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。
可疑：檢測(cè)通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)
結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽性，否則為陰性。
陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。
6. 檢測(cè)方法的局限性
1）樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
2）樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
3）陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
4）病原體在流行過程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
5）不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
6）試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果；
7）本檢測(cè)結(jié)果僅供參考，如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品：無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。
8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率為100％。
低檢測(cè)限：1.0×10 3copies/mL。
精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測(cè) Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%。
公司優(yōu)勢(shì)：
1）質(zhì)量：我司提供的的試劑為世界
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