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柯薩奇病毒A16型(CAV-16)熒光PCR檢測試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱：柯薩奇病毒 A16 型（CAV-16）核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
Name ：Diagnostic Kit for Coxsackievirus type A16 RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規(guī)格】48 份/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測的糞便或腹瀉物等標(biāo)本中柯薩奇病毒A16型RNA，適用于柯薩奇病毒A16型感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對柯薩奇病毒A16型特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對柯薩奇病毒A16型RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
名 稱 規(guī) 格
酶液 50μl×1 管
CAV-16 反應(yīng)液 1.0ml×1 管
CAV-16 陽性質(zhì)控品 50μl ×1 管
陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復(fù)凍融少于 5 次，
有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ
Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。
【標(biāo)本采集】
取糞便或腹瀉物置入無菌玻璃管中，用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。
【保存和運輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標(biāo)
本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1樣本前處理
取黃豆顆粒大小糞便或 100uL 水樣腹物置于 1.5mL 離心管中，按 RNA 提取試劑
盒說明書進(jìn)行提取。
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取
法），請按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性
對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 CAV-16 反應(yīng)液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl，分別加入相應(yīng)的反
應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇：
設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲
線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。
5.2結(jié)果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；
可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
6. 檢測方法的局限性
樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
試劑運輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；
本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品：無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32；
以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。
8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率
為 100％。
低檢測限：5.0×102copies/ml。
精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%。
柯薩奇病毒A16型(CAV-16)熒光PCR檢測試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：
| 1211牛巴氏桿菌(PB)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 1111新孢子蟲(Ne)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 1011牛結(jié)節(jié)疹病毒(LSDV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 0911牛傳染性鼻氣管炎病毒(IBRV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 0711炭疽桿菌(BA)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 0511綿羊痘病毒(SPPV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 0411山羊痘病毒(GTPV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
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| 0211牛副結(jié)核分歧桿菌(MPB)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
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