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口蹄疫病毒A型（FMDV-A）熒光PCR檢測試劑盒說明書
【產品名稱】
商品名稱：口蹄疫病毒 A 型（FMDV-A）核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
Name ：Diagnostic Kit for Foot-and-mouth Disease Virus Type A RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規格】48 份/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測的水泡皮及水泡液、O/P 液等標本中口蹄疫病毒 A 型 RNA，適用于口蹄疫病毒A型感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對口蹄疫病毒A型特異性引物，結合一條特異性熒光探針，用一步法熒光RT-PCR技術對口蹄疫病毒A型RNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融少于 5 次，
有效期 12 個月。
【標本采集】
病死或撲殺動物，取水泡皮及水泡液；待檢活動物，取 O/P 液 2~3mL。
【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標
本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1樣本前處理
水泡皮樣品：稱取水泡皮 0.05g 于研磨器中研磨，加入生理鹽水繼續研磨，待勻
漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100uL 于 1.5mL 滅
菌離心管中；OP 液或水泡液樣品，直接取 100uL 置于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取
法），請按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準備區）
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性
對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑 FMDV-A 反應液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣（樣本處理區）
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl，分別加入相應的反
應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；熒光通道選擇：
檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿
選擇 ROX 參比熒光。
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲
線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。
5.2結果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數增長曲線；
可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
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