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【產品名稱】
商品名稱：**色葡萄球菌(SA)核酸檢測試劑盒
Name ：Staphylococcus aureus (SA) nucleic acid detection kit (PCR- fluorescence probe method)
【包裝規格】50T/盒
**色葡萄球菌(SA)核酸檢測試劑盒【預期用途】
本試劑盒適用于檢測標本中指標的定量檢測，輔助診斷。
名 稱 | 規 格 |
酶液 | 50μL×1 管 |
反應液 | 1.0mL×1 管 |
陽性質控品 | 50μL ×1 管 |
陰性質控品 | 250μL ×1 管 |
詳見說明書
注：
1） 不同批號試劑不能混用。
2） 試劑盒內各試劑組份足夠包裝規格所標示的檢測次數。
本試劑盒對指標特異核酸序列設計引物和探針，用一步法熒光RT-PCR 技術對指標 RNA 進行體外擴增檢測，用于對可疑感染者的病原學診斷。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1 樣本前處理
【標本采集】
拭子：應使用與用采樣拭子，適度拭抹咽后壁和兩側扁桃體部位，應避免觸及舌 部 ； 迅 速 將 拭 子 放 入 標 本 采 集 管 中 ， 旋 緊 管 蓋 并 密 封 ， 以 防 干 燥 。
全血：疑似感染的血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，8000rpm 離心 2min，取適量上清液于 1.5mL 滅菌離心管中。痰： 以清晨的第一口痰為宜。先用清水漱口，囑患者用力咳出深部的痰于無菌樣本保存管，密封，即可送檢。
【標本采集】
病死或撲殺禽，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活禽，用棉拭子取分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。
【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但丌能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。
1.2DNA 提取
1) 對上述處理好的標本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒溫處理 10min，13,000rpm 離心 5min，取上清液轉移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產的 DNA 提取試劑*（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的DNA 提取試劑*（離心柱提取法），請按照試劑盒說明書進行操作。
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑 | 反應液 | 酶液 |
用量 | 20μL | 1μL |
將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，21uL/管。
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。
4.3 推薦循環參數設置：
步驟 | 循環數 | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 42℃ | 20min | 否 |
2 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
3 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
5.1 結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、
stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且有明顯的擴增曲線。
可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現明顯曲線的樣本建議重復試驗，重復試驗結果如果同樣出現 Ct 值≤35.0 和明顯擴增曲線則為陽性，否則為陰性。
陰性：樣本檢測結果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。
陰性質控品：無明顯擴增曲線且無 Ct 值顯示；
陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
① 樣本檢測結果不樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
②樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；
③陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
④病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
⑤不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
⑥試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次，有效期 12 個月。
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
病死或撲殺動物，取水泡皮及水泡液；待檢活動物，取 O/P 液 2~3mL。
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。
【產品圖片】
【生產企業】
企業名稱：上海晅科生物科技有限公司
上海晅科生物科技有限公司生產的熒光PCR檢測試劑盒質量高，價格低，售后有保證。為您的實驗保駕護航。
請直接向我司客服索取說明書
本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷。
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