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禽流感H9病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名：禽流感H9病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza H9 Virus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預(yù)期用途】 禽流感又名真性雞瘟或歐洲雞瘟，是由A型禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的禽類的一種急性、高度致死性傳染病，以急性敗血性死亡到無癥狀帶毒為特征。
禽流感H9亞型抗體ELISA檢測(cè)試劑盒(阻斷法)用于檢測(cè)禽類血清中禽流感H9病毒抗體，可用于免疫效果評(píng)價(jià)、輔助診斷等。
【原 理】
禽流感H9亞型抗體ELISA檢測(cè)試劑盒(阻斷法)由預(yù)包被禽流感H9病毒抗原的酶標(biāo)板、抗體工作液、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法原理檢測(cè)禽血清或血漿中禽流感H9病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入稀釋的待檢血清和抗體工作液，若樣品中含有禽流感H9病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽流感H9病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 | 規(guī)格/96T×2 | 規(guī)格/96T×5 |
1 | 酶標(biāo)記物 | 11ml×1(紅蓋) | 11ml×2(紅蓋) | 26ml×2(紅蓋) |
2 | 抗體工作液 | 6ml×1(藍(lán)蓋) | 11ml×1(藍(lán)蓋) | 26ml×1(藍(lán)蓋) |
3 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1(白蓋) | 40ml×1(白蓋) | 200ml×1(白蓋) |
4 | 底物液A | 6ml×1(白蓋) | 11ml×1(白蓋) | 26ml×1(白蓋) |
5 | 底物液B | 6ml×1(黑蓋) | 11ml×1(棕蓋) | 26ml×1(黑蓋) |
6 | 終止液 | 6ml×1(黃蓋) | 11ml×1(黃蓋) | 26ml×1(黃蓋) |
7 | 陽性對(duì)照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
8 | 陰性對(duì)照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
9 | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
10 | 蓋板膜 | 1 | 2 | 5 |
11 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
12 | 說明書 | 1 | 1 | 1 |
【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
蛋黃：取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上清作為樣本。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照50μl；樣品孔每孔先加入40μl工作洗滌液,再加入10μl待檢樣本（稀釋比例為1:5）。
4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應(yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350 ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)15分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照吸光值≥1.0，陽性對(duì)照吸光值≤陰性對(duì)照吸光值×50%。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.PI=（1-樣本值/陰性對(duì)照孔均值）×100%；
2.未曾免疫雞群：PI≥50為陽性；PI＜50為陰性。
3.免疫雞群：監(jiān)測(cè)并記錄樣本當(dāng)時(shí)的抗體水平，根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動(dòng)向。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)禽流感H9病毒抗體，根據(jù)PI值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。
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