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艱難梭菌(TCD-A)熒光探針PCR核酸檢測試劑盒說明書
【產品名稱】
通用名稱：艱難梭菌(TCD-A)核酸擴增檢測試劑盒(PCR 熒光探針法)
Name ：Clostridium difficile (TCD-A) nucleic acid amplification detection kit (PCR fluorescence probe method)
【包裝規格】48T/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測水樣糞便等樣本中的艱難梭菌，用于艱難梭菌感染的輔助診斷，其檢測結果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術，設計一對艱難梭菌特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR 技術對艱難梭菌的核酸進行體外擴增檢測， 用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
【試劑組成】
| 0232轉基因大豆MON87769品系核酸檢測試劑盒(PCR法) 48T |
| 0222轉基因大豆MON87708品系核酸檢測試劑盒(PCR法) 48T |
| 0212轉基因大豆MON87705品系核酸檢測試劑盒(PCR法) 48T |
| 0132轉基因植物FmV35S啟動子核酸檢測試劑盒(PCR法) 48T |
| 0122轉基因植物NOS終止子核酸檢測試劑盒(PCR法) 48T |
| 0112轉基因植物CamV35S啟動子核酸檢測試劑盒(PCR法) 48T |
| 1021大豆內源基因Lectin核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產的DNA 提取試劑盒（離心
柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準備區）
根據待檢測樣本總數，設所需要的PCR 反應管管數為N(N=樣本數+1 管陰性
對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
3. 加樣（樣本處理區）
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，分別加入相應的反應
管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）
NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。
5. 結果分析判定
【注意事項】
1）所有操作嚴格按照說明書進行；
2）試劑盒內各種組分使用前應自然融化，*混勻并短暫離心；
3）反應液應避光保存；
4）反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5）使用一次性吸頭、一次性手套和各區工作服；
6）樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；
7）實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8）試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全 通則》進行處理。
5.1 結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體
傾斜時，根據分析后圖像調節Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop
值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰
性對照)，重新分析結果。
5.2 結果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數增長曲線。
可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現典型擴增曲線的樣本建議重復試驗，重復試驗
結果出現 Ct 值≤35.0 和典型擴增曲線者為陽性，否則為陰性。
陰性：樣本檢測結果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。
6. 檢測方法的局限性
1）樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
2）樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；
3）陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
4）病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
5）不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
6）試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；
7）本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
7. 質控標準
陰性質控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以
上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
8. 產品性能指標
陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率為100％。
低檢測限：1.0×10 3copies/mL。
精密度：批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數（CV）均小于等于 3%。
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