|
霍亂弧菌(VC)熒光PCR核酸擴增檢測試劑盒說明書
【產品名稱】
通用名稱：霍亂弧菌 (VC)核酸擴增檢測試劑盒(PCR 熒光探針法)
Name ：Diagnostic Kit for Vibrio cholerae DNA （PCR Fluorescence Probing）
【包裝規格】48T/盒
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1樣本前處理
水樣便 13000rpm 離心 2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術剪剪碎混勻
后取 0.05g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至
1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100uL 于 1.5mL 滅菌離
心管中；疑似污染的水直接取 100uL
1.2DNA 提取
1) 對上述處理好的標本加入等體積核酸提取液（固體標本加入50uL核酸提取液），
100℃恒溫處理 10 分鐘，13,000 rpm 離心 5 分鐘，取上清液轉移至新的 1.5ml
EP 管，-20℃保存；
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產的 DNA 提取試劑
盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準備區）
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性
對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑 VC 反應液 酶液
用量（樣本數為 N） 20μl 1μl
3. 加樣（樣本處理區）
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl，分別加入相應的反
應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；
熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）
NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環參數設置：
步驟 循環數 溫度 時間 收集熒光信號
1 1 cycle 95℃ 10min 否
2 40 cycle
94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 結果分析判定
5.1結果分析條件設定
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測水樣糞便，疑似污染的水、食物等樣本中的霍亂弧菌，用于霍亂弧菌感染的輔助診斷，其檢測結果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對霍亂弧菌特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術對霍亂弧菌的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件和有效期】
試劑盒保存于-20±5℃，有效期 12 個月；
避免反復凍融，凍融次數不超過 5 次；試劑開瓶后，在室溫條件下放置時間不
應超過 8 小時；運輸采用干冰（或者冰袋）保持低溫，運輸時間不應超過 4 天。試
劑盒生產日期見產品標簽。
【適用儀器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ
Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本要求】
標本采集：水樣便取0.5~1mL；疑似污染的食物取1g
保存運輸：上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出
現整體傾斜時，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍
內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上
下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。
5.2結果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數增長曲線；
可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
6. 檢測方法的局限性
1）樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
2）樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；
3）陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
4）病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
5）不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
6）試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；
7）本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
7. 質控標準
陰性質控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32；
以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
8. 產品性能指標
陰陽性參考品符合率：8 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合
率為 100％。
低檢測限：2.0×102copies/ml。
精密度：批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數（CV）均≤3%。
【注意事項】
1.所有操作嚴格按照說明書進行；
2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，*混勻并短暫離心；
3.反應液應避光保存；
4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區工作服；
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。
公司優勢：
1）質量：我司提供的的試劑為世界
2）價格：價格實惠，量大從優。
4）服務：提供完整的售前、售后和售中服務。售后到底
如需訂購霍亂弧菌(VC)熒光PCR核酸擴增檢測試劑盒，請聯系我們。
此外公司還提供：
| 0111口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 1211鏈球菌B族(GBS)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 1111溶血性鏈球菌A群(GAS)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 1011氣腫疽梭菌(CC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 0911類鼻疽伯克霍爾德菌(PP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T |
| 0811廣州管圓線蟲核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法） 48T |
掃一掃,關注我們
