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丙型肝炎病毒（HCV）熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱：丙型肝炎病毒（HCV）核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
Name ：Diagnostic Kit for Human Hepatitis Virus type C RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規(guī)格】48 份/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測的疑似感染病人的血液等標(biāo)本中丙型肝炎病毒 RNA，適用
于丙型肝炎病毒感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對丙型肝炎病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步
法熒光 RT-PCR 技術(shù)對丙型肝炎病毒 RNA 進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑
感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
名 稱 規(guī) 格
酶液 50μl×1 管
HCV 反應(yīng)液 1.0ml×1 管
HCV 陽性質(zhì)控品 50μl ×1 管
陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復(fù)凍融少于 5 次，
有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ
Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。
【標(biāo)本采集】
疑似感染病人的靜脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。
【保存和運輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標(biāo)
本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1樣本前處理
按 RNA 提取試劑盒說明書進行提取。
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取
法），請按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性
對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 HCV 反應(yīng)液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl，分別加入相應(yīng)的反
應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）
4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇：
檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿
選擇 ROX 參比熒光。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號
1 1cycle 42℃ 20min 否
2 1 cycle 95℃ 10min 否
3 40 cycle
94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲
線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果。
5.2結(jié)果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；
可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
6. 檢測方法的局限性
1）樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
2）樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；
3）陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
4）病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
5）不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；
6）試劑運輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；
7）本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32；
以上條件應(yīng)同時滿足，否則實驗視為無效。
8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率
為 100％。
低檢測限：5.0×102copies/ml。
精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%。
【注意事項】
1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進行；
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，*混勻并短暫離心；
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存；
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服；
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。
公司優(yōu)勢：
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