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柯薩奇病毒(CV)熒光探針法PCR檢測試劑盒說明書
【產品名稱】
商品名稱：柯薩奇病毒 A6 型（CAV-6）核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
Name ：Diagnostic Kit for Coxsackievirus type A6 RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規格】48 份/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測的糞便或腹瀉物等標本中柯薩奇病毒 A6 型 RNA，適用于柯薩奇病毒 A6 型感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對柯薩奇病毒 A6 型特異性引物，結合一條特異性熒光探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術對柯薩奇病毒 A6 型 RNA 進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
【試劑組成】
名 稱 規 格
酶液 50μl×1 管
CAV-6 反應液 1.0ml×1 管
CAV-6 陽性質控品 50μl ×1 管
陰性質控品 250μl ×1 管
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融少于 5 次，
有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ
Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】
取糞便或腹瀉物置入無菌玻璃管中，用無菌棉球將試管塞緊后，密閉送檢。
【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標
本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1樣本前處理
取黃豆顆粒大小糞便或 100uL 水樣腹物置于 1.5mL 離心管中，按 RNA 提取試劑
盒說明書進行提取。
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取
法），請按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準備區）
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性
對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑 CAV-6 反應液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣（樣本處理區）
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl，分別加入相應的反
應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；熒光通道選擇：
檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿
選擇 ROX 參比熒光。
4.3推薦循環參數設置：
步驟 循環數 溫度 時間 收集熒光信號
1 1cycle 42℃ 20min 否
2 1 cycle 95℃ 10min 否
3 40 cycle
94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 結果分析判定
5.1結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲
線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。
6. 檢測方法的局限性
樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；
樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；
陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；
病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；
不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；
試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或
定量檢測不準確的結果；
本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
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