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牛流行熱病毒(BEFV)熒光PCR核酸檢測試劑盒說明書
【產品名稱】
商品名稱：牛流行熱病毒（BEFV）核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)
Name ：Diagnostic Kit for Bovine Ephemeral Fever Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規格】48 份/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測的牛全血等液體樣本等標本中牛流行熱病毒 RNA，適用于
牛流行熱病毒感染的輔助診斷。其檢測結果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用一對牛流行熱病毒特異性引物，結合一條特異性熒光探針，用一步
法熒光 RT-PCR 技術對牛流行熱病毒 RNA 進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑
感染者的病原學診斷。
【試劑組成】
| 0312禽白血病病毒(ALV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)48T |
| 0222新城疫病毒野生型(NDV-W)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法48T 新城疫病毒中強毒 |
| 0212新城疫病毒(NDV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法)48T |
| 0914雞傷寒沙門氏菌(SPP.G)核酸檢測試劑盒(PCR法)48T |
| 0912雞腸炎沙門氏菌(SPP.E)核酸檢測試劑盒(PCR法)48T |
| 1312禽結合桿菌(ATB)核酸檢測試劑盒(PCR法)48T |
| 1212鴨型乙型肝炎病毒(DHBV)核酸檢測試劑盒(PCR法)48T |
名 稱 規 格
酶液 50μl×1 管
BEFV 反應液 1.0ml×1 管
BEFV 陽性質控品 50μl ×1 管
陰性質控品 250μl ×1 管
說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融少于 5 次，
有效期 12 個月。
【適用儀器】
| 1112雞傳染性貧血病病毒(CIAV)核酸檢測試劑盒(PCR法)48T |
| 1014禽腺病毒(AADV)核酸檢測試劑盒(PCR法)48T |
| 1012雞減蛋綜合征病毒(EDSV)核酸檢測試劑盒(PCR法)48T |
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ
Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】
抽取全血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。
【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標
本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。
【使用方法】
| 0712副雞嗜血桿菌(HPG)核酸檢測試劑盒(PCR法)48T |
| 0612鴨瘟病毒(DPV)核酸檢測試劑盒(PCR法)48T |
| 0412雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(PCR法)48T |
1. 樣品處理（樣本處理區）
1.1樣本前處理
按 RNA 提取試劑盒說明書進行提取。
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取
法），請按照試劑盒說明書進行操作。
2. 試劑配制（試劑準備區）
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性
對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
試劑 BEFV 反應液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣（樣本處理區）
將步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μl，分別加入相應的反
應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
4. PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；熒光通道選擇：
檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿
選擇 ROX 參比熒光。
4.3推薦循環參數設置：
步驟 循環數 溫度 時間 收集熒光信號
1 1cycle 42℃ 20min 否
2 1 cycle 95℃ 10min 否
3 40 cycle
94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
5. 結果分析判定
5.1結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲
線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。
5.2結果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數增長曲線；
可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct
值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；
陰性：樣本檢測結果 Ct 值>37 或無 Ct 值。
7. 質控標準
陰性質控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；
陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32；
以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。
8. 產品性能指標
陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率
為 100％。
低檢測限：5.0×102copies/ml。
精密度：批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數（CV）均小于等于 3%。
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