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人鼻病毒（HRV）熒光定量PCR核酸檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱：人鼻病毒（HRV）核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR 熒光探針?lè)?
Name ：Diagnostic Kit for Human Rhinovirus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)
【包裝規(guī)格】48 份/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測(cè)的咽拭子標(biāo)本等標(biāo)本中人鼻病毒 RNA，適用于人鼻病毒感
染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒用一對(duì)人鼻病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒
光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)人鼻病毒 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的
病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
名 稱 規(guī) 格
酶液 50μl×1 管
HRV 反應(yīng)液 1.0ml×1 管
HRV 陽(yáng)性質(zhì)控品 50μl ×1 管
陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管
說(shuō)明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
| 0431霍亂弧菌(O139)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0421霍亂弧菌(O1)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0411霍亂弧菌(VC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0311志賀氏菌(SH)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0211沙門氏菌(Spp)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0171致病性大腸桿菌(EPEC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0161產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(ETEC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0151侵襲性大腸桿菌(EIEC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0141粘附性大腸桿菌(EAEC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0131出血性大腸桿菌(EHEC)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 5 次，
有效期 12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ
Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。
【標(biāo)本采集】
采集病人的咽拭子標(biāo)本，應(yīng)使用采樣拭子，適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部
位，應(yīng)避免觸及舌部；迅速將拭子放入標(biāo)本采集管中，旋緊管蓋并密封，以防干燥。
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標(biāo)
本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）
1.1樣本前處理
取 100uL 拭子標(biāo)本于 1.5mL 滅菌離心管中。
4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；
4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇：
檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請(qǐng)勿
選擇 ROX 參比熒光。
4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間 收集熒光信號(hào)
1 1cycle 42℃ 20min 否
2 1 cycle 95℃ 10min 否
3 40 cycle
94℃ 15sec 否
55℃ 30sec 是
1.2RNA 提取
推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取
法），請(qǐng)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性
對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 HRV 反應(yīng)液 酶液
用量 20μl 1μl
3. 加樣（樣本處理區(qū)）
將步驟 1 提取的 RNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl，分別加入相應(yīng)的反
應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
5. 結(jié)果分析判定
5.1結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲
線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15
范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value
值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。
| 1011難難梭狀芽胞桿菌(Cd)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0911金黃色葡萄球菌(SA)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0811副傷寒桿菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0711傷寒桿菌(ST)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0611甲型副傷寒沙門氏菌(SPA)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0511副溶血性弧菌(VP)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
| 0441霍亂弧菌CTX基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)? 48T |
7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品：無(wú)明顯擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示；
陽(yáng)性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32；
以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)
陰陽(yáng)性參考品符合率：5 份陽(yáng)性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率
為 100％。
低檢測(cè)限：5.0×102copies/ml。
精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測(cè) Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%。
人鼻病毒（HRV）熒光定量PCR核酸檢測(cè)試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：
| 1921肉毒桿菌(E/F型) |
| 1911肉毒桿菌(A/B型) |
| 1811空腸彎曲菌(CJ) |
| 1711產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌(CP) |
| 1611創(chuàng)傷弧菌(VV) |
| 1511溶藻弧菌(VA) |
| 1411嗜水氣單胞菌(AH) |
| 1311小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(YE) |
| 1211蠟樣芽孢桿菌(BC) |
| 1111單增李斯特菌(LM) |
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